產品名稱：小細胞肺癌細胞；NCI-H446
英文簡稱：NCI-H446細胞

貨號：LZ-X968350
規格：T25
生長特性：貼壁/懸浮生長，混合

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凍存培養基：
凍存細胞時必須使用推薦的凍存培養基。凍存培養基中應含有 DMSO 或者甘油等冷凍保護劑。還可使用專門配制的*凍存培養基。
1）細胞凍存培養基是一種用于哺乳動物細胞的即用型*凍存培養基，其所含胎牛血清和牛血清比例經過優化，可改善細胞活力以及解凍后的細胞復蘇效果。 
2）凍存培養基是一種化學成分確定的、無蛋白、無菌凍存培養基，含10% DMSO，適用于多種干細胞和原代細胞 (黑色素細胞除外) 的凍存。
培養細胞凍存方案：
以下實驗方案介紹了培養細胞凍存的一般流程。詳細的實驗方案，必須參閱針對具體細胞的產品說明書。 
1.配制凍存培養基，于2°C至8°C下儲存，直至使用。請注意使用何種凍存培養基取決于所用細胞系。
2.凍存貼壁細胞時，利用傳代時所用方法輕柔地使細胞從組織培養容器上脫離下來。用該細胞所需*培養基重新懸浮細胞。
3.采用、細胞計數儀按照臺盼藍拒染法或者使用自動細胞計數儀測定總細胞數和活細胞百分比。根據所需活細胞密度，計算凍存培養基需要量。
4.以大約100-200×g的離心力將細胞懸液離心5至10分鐘。在無菌條件下小心倒掉上清液，不要攪動細胞沉淀。
注：離心速度和時間取決于細胞種類。
5.用預冷的凍存培養基重新懸浮細胞沉淀，將其調整至該細胞適合的活細胞密度。
6.將細胞懸液分裝到若干凍存管中。分裝時，應不時輕輕混合細胞，使其保持均勻的細胞懸液狀態。
7.使用可控制降溫速度的冷凍裝置冷凍細胞，使溫度每分鐘大約降低  1°C。或者，將裝有細胞的凍存管放入凍存盒中，然后將凍存盒置于-80°C條件下過夜。

實驗材料： 
1. 50ml 配制好的RPMI1640培養液1瓶；8ml小牛血清（FCS) 1瓶；100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶；PBS(-)1 瓶 
2. 100ml滅菌燒杯2個；
3、50ml離心筒2個 
4、滅菌培養皿1個，細胞培養瓶1個 
5、1ml ，200μl移液器各1支；槍頭盒2個；無菌玻璃攪拌棒1個 
6、細胞計數板1塊； 
7、滅好菌的鑷子1把，剪刀1把； 
8、酒精燈1臺；

實驗報告：
一、分離與培養：
   1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大小；
   2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 胰酶和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養基終止消化后4℃放置；
   3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織*被消化；
   4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸，接種于25cm2培養瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養箱中培養；
   5、差速貼壁1h后，吸出培養基，按實驗需要接種于6孔板中繼續培養；
二、免疫熒光鑒定：
   1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；
   2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
   3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；
   4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；
   5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；
   6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微
鏡下觀察圖像并拍照。

注意事項：
     盡管經測試Annexin V-FITC反復凍融5次對于其檢測效果無顯著影響，但為取得良好的使用效果，3-6個月內推薦4℃保存，并適當注意避免反復凍融。
     如果有細菌或真菌污染，會嚴重影響檢測效果。
     染色后宜盡快檢測，時間過長可能會導致凋亡或壞死細胞的數量增加。
     如果細胞收集過程中使用了胰酶，需注意設法去除殘留的胰酶。殘留的胰酶會消化并降解Annexin V-FITC，導致染色失敗。
     熒光物質均易發生淬滅，在進行熒光觀察時，盡量縮短觀察時間，同時在操作和存放過程中也盡量注意避光保存。
     用于流式細胞儀檢測時，如果發現Annexin V-FITC單獨染色時出現了過多的PI假陽性細胞，并且通過調整相關設置和參數也無法改善，可以用PBS將Annexin V-FITC稀釋3-10倍后再進行檢測，這樣通常可以有效減少假陽性的壞死細胞。
     需自備PBS。
     本產品于專業人員的科學研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內。
     為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
綿羊IV型膠原(COL4)酶聯免疫吸附測定試劑盒2,2-雙(2-羥-5-聯苯)烷粉褐粉孢牛肝菌*拉丁屬名: Polaromonas vacuolata

綿羊組織型纖溶酶原激活因子(tPA)酶聯免疫吸附測定試劑盒2 - 二苯膦-2' - （N組，n -二） - 聯苯空泡單胞菌拉丁屬名: Saccharomyces  cerevisiae

綿羊蛋白二硫化物異構酶A6(PDIA6)酶聯免疫吸附測定試劑盒2 - 二苯膦-2' - （N組，n -二） - 聯苯釀酒酵母用途: 與沙打旺、斜莖黃芪共生固氮

綿羊降鈣素受體(CTR)酶聯免疫吸附測定試劑盒 乙(1S,2R)-2-[N-芐-N-(三苯磺酰)氨]-1-苯酯[交叉反應用試劑]中慢生華癸根瘤菌拉丁屬名: Lactobacillus  plantarum

綿羊乙酰輔酶A乙酰轉移酶2(ACAT2)酶聯免疫吸附測定試劑盒 乙(1R,2S)-2-[N-芐-N-(三苯磺酰)氨]-1-苯酯[交叉反應用試劑]植物乳桿菌拉丁屬名: Clostridium beijerinckii

綿羊凝血因子Ⅶ(F7)酶聯免疫吸附測定試劑盒  (1R,2R,5R)-(+)-2-羥-3-蒎拜氏梭菌拉丁屬名: Penicillium raistrickii

綿羊天青殺素1(AZU1)酶聯免疫吸附測定試劑盒  (1R,2R,5R)-(+)-2-羥-3-蒎雷斯青霉拉丁屬名: Gibberella sp.

綿羊催產素受體(OTR)酶聯免疫吸附測定試劑盒3-溴-1,8-萘二酐赤霉菌注意事項: 僅用于科學研究或者工業應用等非醫療目的，不可用于類或動物的臨床診斷或治療，非藥用，非食用

綿羊碳酐酶XII(CA12)酶聯免疫吸附測定試劑盒3-溴-1,8-萘二酐白靈菇拉丁屬名: Galactomyces geotrichum

綿羊核有絲分裂器蛋白1(NUMA1)酶聯免疫吸附測定試劑盒2-噻吩-5-地霉半乳糖酵母用途: 與胡枝子共生固氮

綿羊多形核白彈性蛋白酶(PMN Elastase)酶聯免疫吸附測定試劑盒2-噻吩-5-慢生根瘤菌拉丁屬名: Aspergillus ruber

綿羊粘蛋白5AC(MUC5AC)酶聯免疫吸附測定試劑盒2-噻吩-5-赤曲霉拉丁屬名: Pichia fermentans

綿羊間隙連接蛋白31(CX31)酶聯免疫吸附測定試劑盒 2-噻吩-5-發酵畢赤酵母注意事項: 僅用于科學研究或者工業應用等非醫療目的，不可用于類或動物的臨床診斷或治療，非藥用，非食用

綿羊輕肽神經絲蛋白(NEFL)酶聯免疫吸附測定試劑盒異硫乙乙酯白地霉拉丁屬名: Absidia cylindrospora

綿羊生長激素2(GH2)酶聯免疫吸附測定試劑盒異硫乙乙酯柱孢犁頭霉拉丁屬名: Nocardioides  terrigena

綿羊肌球蛋白輕鏈1(MYL1)酶聯免疫吸附測定試劑盒5-氟-2-三氟土生類諾卡氏菌用途: Produces 5'-nucleotides by cell culture on hydrocarbons and subsequent degradation of iacellular RNA at alkaline pH (U.S. Pat. 3,652,395).
NCI-H446細胞雞失調癥蛋白質1(ATXN1)酶聯免疫吸附測定試劑盒Anti-DPPA2/FITC  熒光素標記多能發育相關因2抗體IgG

雞3-硝酪氨酸(3-NT)酶聯免疫吸附測定試劑盒 Anti-DPV/FITC  熒光素標記抗鴨瘟病抗體IgG

雞碳酸酐酶II(CA2)酶聯免疫吸附測定試劑盒Anti-DR3/TNF- AlphaR/TRAMP /FITC  熒光素標記TNF-α膜受體抗體/DR3 死亡受體3抗體IgG

雞前列腺素D2合成酶(PGD2S)酶聯免疫吸附測定試劑盒Anti-DR4/APO2/TRAILR1 /FITC  熒光素標記死亡受體4抗體IgG

雞甲胎蛋白(αFP)酶聯免疫吸附測定試劑盒 Anti-DR5/APO-2L/TRAILR2/CD262/FITC  熒光素標記腫瘤調亡素/死亡受體5抗體IgG

雞多藥耐藥相關蛋白(MRP)酶聯免疫吸附測定試劑盒Anti-DRADA/ADAR1/FITC  熒光素標記雙鏈RNA腺苷酸脫氨酶抗體IgG

雞集聚蛋白(AGRN)酶聯免疫吸附測定試劑盒 Anti-DRADA/ADAR1/FITC  熒光素標記雙鏈RNA腺苷酸脫氨酶抗體（N端）IgG

雞促胰液素/分泌素受體(SCTR)酶聯免疫吸附測定試劑盒Anti-DTNB/FITC  熒光素標記肌Dystrobrevin β蛋白抗體IgG