注意事項(xiàng)：1．基礎(chǔ)程序；2．?dāng)U增溫度和延伸溫度；3．反應(yīng)時(shí)間；4．循環(huán)次數(shù)；5．PCR 反應(yīng)液的配制；6．PCR技術(shù)的基本原理；7．PCR的反應(yīng)動(dòng)力學(xué)；8．PCR擴(kuò)增產(chǎn)物；9．PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。

組成及試劑配制:
1、酶標(biāo)板：一塊（96孔）
2、 標(biāo)準(zhǔn)品（凍干品）： 2瓶，請(qǐng)臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml，蓋好后室溫靜置大約10分鐘，同時(shí)反復(fù)顛倒/搓動(dòng)以助溶解，其濃度為200 U/L，然后做系列倍比稀釋（注：不要直接在板中進(jìn)行倍比稀釋），分別配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標(biāo)準(zhǔn)品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述標(biāo)準(zhǔn)品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中，混勻即可，其余濃度以此類推。
3、 樣品稀釋液：1×20ml。
4、 檢測(cè)稀釋液A：1×10ml。
5、 檢測(cè)稀釋液B：1×10ml。
?
實(shí)驗(yàn)過(guò)程：
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2．對(duì)應(yīng)目的基因的特異引物（在PCR反應(yīng)中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制，而不能從無(wú)到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此，擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o(wú)菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
視PCR儀有無(wú)熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長(zhǎng)期保存。
4．PCR的電泳檢測(cè)：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測(cè)。
三、注意事項(xiàng)
１．PCR反應(yīng)應(yīng)該在一個(gè)沒(méi)有DNA污染的干凈環(huán)境中進(jìn)行設(shè)立一個(gè)的PCR實(shí)驗(yàn)室。
２．純化模板所選用的方法對(duì)污染的風(fēng)險(xiǎn)有極大影響。一般而言，只要能夠得到可靠的結(jié)果，純化的方法越簡(jiǎn)單越好。
３．所有試劑都應(yīng)該沒(méi)有核酸和核酸酶的污染。操作過(guò)程中均應(yīng)戴手套。
４．PCR試劑配制應(yīng)使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水，采用0.22μm濾膜過(guò)濾除菌或高壓滅菌。
５．試劑都應(yīng)該以大體積配制，試驗(yàn)一下是否滿意，然后分裝成僅夠一次使用的量?jī)?chǔ)存，從而確保實(shí)驗(yàn)與實(shí)驗(yàn)之間的連續(xù)性。
６．試劑或樣品準(zhǔn)備過(guò)程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子，玻璃器皿應(yīng)洗滌干凈并高壓滅菌。
７．PCR的樣品應(yīng)在冰浴上化開(kāi)，并且要充分混勻。
硅鎂型吸附劑使用說(shuō)明書Anti-LRRC25研究領(lǐng)域  細(xì)胞生物 神經(jīng)生物學(xué) 細(xì)胞類型標(biāo)志物 細(xì)胞骨架

大鼠神經(jīng)星形膠質(zhì)細(xì)胞現(xiàn)貨供應(yīng)Anti-L3MBTL3研究領(lǐng)域  細(xì)胞生物 神經(jīng)生物學(xué) 細(xì)胞膜受體

馬血清（500ml）價(jià)格Anti-LMX1A研究領(lǐng)域  腫瘤 細(xì)胞生物 染色質(zhì)和核信號(hào) 神經(jīng)生物學(xué) 細(xì)胞凋亡 細(xì)胞周期蛋白 線粒體

兔骨保護(hù)素（OPG）elisa試劑盒Anti-LTBP1研究領(lǐng)域  腫瘤 細(xì)胞生物 免疫學(xué) 染色質(zhì)和核信號(hào) 信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo) 新陳代謝 表觀遺傳學(xué)

McCoy's 5A（含HEPES）報(bào)價(jià)Anti-LRRFIP2研究領(lǐng)域  腫瘤 心血管 細(xì)胞生物 信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo) 細(xì)胞凋亡

香蜂草苷14259-47-3價(jià)格Anti-LRRFIP1研究領(lǐng)域  神經(jīng)生物學(xué) 通道蛋白

瑞氏姬姆薩復(fù)合染液價(jià)格Anti-LPCAT2/Acyltransferase like 1研究領(lǐng)域  細(xì)胞生物 神經(jīng)生物學(xué) 信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo) 細(xì)胞凋亡 Alzheimer's

山羊促腎上腺皮質(zhì)激素釋放因子（CRF）elisa試劑盒Anti-LPAAT-epsilon/AGPAT5研究領(lǐng)域  細(xì)胞生物 細(xì)胞凋亡

植物（擬南芥）超氧化物歧化酶銅鋅1（CSD1）elisa試劑盒Anti-lipotropin gamma研究領(lǐng)域  細(xì)胞生物 信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo) 干細(xì)胞 細(xì)胞周期蛋白

綿羊睪酮（T）elisa試劑盒Anti-Limd1研究領(lǐng)域  腫瘤

慶大霉素〖硫酸鹽〗保存Anti-LRSAM1研究領(lǐng)域  細(xì)胞生物 免疫學(xué) 神經(jīng)生物學(xué) 信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo) 細(xì)胞凋亡

依來(lái)鉻氰藍(lán)R價(jià)格Anti-IL-31RA/CRL3研究領(lǐng)域  心血管 細(xì)胞生物 發(fā)育生物學(xué) 神經(jīng)生物學(xué) 信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)

丙同酸鈣保存Anti-LRP1/CD91研究領(lǐng)域  神經(jīng)生物學(xué) 信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)

大鼠 SCUBE1 elisa試劑盒Anti-LMP7研究領(lǐng)域  細(xì)胞生物 免疫學(xué) 通道蛋白

小鼠脈絡(luò)膜血管細(xì)胞說(shuō)明書Anti-Lin-28B研究領(lǐng)域  激酶和磷酸酶

9-甲氧基喜樹(shù)堿Hpt/HP(haptoglobin)  結(jié)合珠蛋白/觸珠蛋白抗原Troponin T/c  心肌特異性肌鈣蛋白T抗體

鹽酸石蒜堿H-ras/Ras/Ras p21 peptide  原癌基因H-ras抗原Tropomyosin  原肌球蛋白1抗體

光甘草定HSTF2/HSF2 peptide  熱休克轉(zhuǎn)錄因子2抗原TROP2/TACD2  細(xì)胞表面糖蛋白Trop2抗體（胰腺癌標(biāo)志物蛋白）

橙黃決明素BCRP/ABCG2(breast cancer resistance protein)  乳腺癌耐藥相關(guān)蛋白（抗原）Trop-2  原肌球蛋白抗體

荷葉堿Hrasls3/HREV107(HRAS like suppressor 3)  HRAS樣抑制因子3抗原Trk C  酪氨酸激酶C抗體(神經(jīng)生長(zhǎng)因子受體的一種)

鷹嘴豆芽素AHSP47(Heat shock protein-47)  熱休克蛋白-47抗原Trk B/NTRK2  酪氨酸激酶B抗體

10-羥基喜樹(shù)堿HSP-90 Alpha(Heat Shock Protein 90 Alpha )  熱休克蛋白90α抗體Trk B/NTRK2  酪氨酸激酶B抗體

可可堿HSP-105 (heat sock protein-105)  熱休克蛋白HSP105抗原TrK A/NTRK1  酪氨酸激酶A抗體

D-松HtrA2/Omi peptide  絲氨酸蛋白酶/線粒體絲氨酸蛋白酶多肽抗原Trk A/B/C  酪氨酸激酶A/B/C抗體

常春藤皂苷元IAA/BSA  吲哚-3-乙酸偶聯(lián)牛血清白蛋白TRIP1/PSMC5  甲狀腺受體相互作用蛋白1抗體
差異支原體PCR檢測(cè)試劑盒價(jià)格人MAX二聚化蛋白1(mxd1)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量：25克

人Na+/H+交換體3(NHE3)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量：RT5克

人D樣受體(NLR)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量：5克

人GO-A抗體(go-AAb)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量：10克

人N端前腦素(NT-proBNP)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量：保存：-20℃1克

人N端外顯肽(Ext-N)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量：保存：-20℃250毫克

人N端中段骨鈣素(N-MID-OT)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量：2～8℃1毫克

人N鈣黏蛋白/神經(jīng)鈣黏蛋白(N-Cad)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量：500毫克
檢測(cè)步驟：
一、 試劑的準(zhǔn)備
從試劑盒中取出熒光PCR反應(yīng)液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振蕩混勻后，10000rpm離心10s。
設(shè)所需要的PCR反應(yīng)管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1管陰性對(duì)照+1管陽(yáng)性對(duì)照)，每個(gè)測(cè)試反應(yīng)體系配制如下表：
試劑 每個(gè)反應(yīng)加入的量 N個(gè)反應(yīng)加入的量
熒光PCR反應(yīng)液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
總量 15 µL N×15µL
（1） 計(jì)算好各試劑的使用量，加入一適當(dāng)體積潔凈離心管中，充分混勻，10000rpm離心10s，向設(shè)定的N個(gè)PCR反應(yīng)管中分別加入15μL熒光PCR反應(yīng)液，向每管中加入處理后樣品或陰性對(duì)照(NTC)和陽(yáng)性對(duì)照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬時(shí)離心10秒。
7.2 qPCR反應(yīng)條件
將各反應(yīng)管放入定量PCR儀器的反應(yīng)槽內(nèi)。
推薦循環(huán)條件:
1循環(huán) 50℃ for 2 min
預(yù)變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
PCR擴(kuò)增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時(shí)收集熒光信號(hào)。報(bào)告基團(tuán)：設(shè)置為FAM。淬滅基團(tuán)：NONE，請(qǐng)勿選擇ROX參比熒光。