注意事項：1．基礎(chǔ)程序；2．?dāng)U增溫度和延伸溫度；3．反應(yīng)時間；4．循環(huán)次數(shù)；5．PCR 反應(yīng)液的配制；6．PCR技術(shù)的基本原理；7．PCR的反應(yīng)動力學(xué)；8．PCR擴(kuò)增產(chǎn)物；9．PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。

組成及試劑配制:
1、酶標(biāo)板：一塊（96孔）
2、 標(biāo)準(zhǔn)品（凍干品）： 2瓶，請臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml，蓋好后室溫靜置大約10分鐘，同時反復(fù)顛倒/搓動以助溶解，其濃度為200 U/L，然后做系列倍比稀釋（注：不要直接在板中進(jìn)行倍比稀釋），分別配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標(biāo)準(zhǔn)品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述標(biāo)準(zhǔn)品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中，混勻即可，其余濃度以此類推。
3、 樣品稀釋液：1×20ml。
4、 檢測稀釋液A：1×10ml。
5、 檢測稀釋液B：1×10ml。
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實驗過程：
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2．對應(yīng)目的基因的特異引物（在PCR反應(yīng)中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計。因此，擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。
三、注意事項
１．PCR反應(yīng)應(yīng)該在一個沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進(jìn)行設(shè)立一個的PCR實驗室。
２．純化模板所選用的方法對污染的風(fēng)險有極大影響。一般而言，只要能夠得到可靠的結(jié)果，純化的方法越簡單越好。
３．所有試劑都應(yīng)該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應(yīng)戴手套。
４．PCR試劑配制應(yīng)使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水，采用0.22μm濾膜過濾除菌或高壓滅菌。
５．試劑都應(yīng)該以大體積配制，試驗一下是否滿意，然后分裝成僅夠一次使用的量儲存，從而確保實驗與實驗之間的連續(xù)性。
６．試劑或樣品準(zhǔn)備過程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子，玻璃器皿應(yīng)洗滌干凈并高壓滅菌。
７．PCR的樣品應(yīng)在冰浴上化開，并且要充分混勻。
類人猿降鈣素（CT）elisa試劑盒Anti-ETFB 研究領(lǐng)域  細(xì)胞生物 免疫學(xué)

大鼠肺成纖維細(xì)胞（Rat Lung Fibroblasts Cells）Anti-EFHC1 研究領(lǐng)域  細(xì)胞生物 免疫學(xué)

U-2 OS（人骨肉瘤細(xì)胞）現(xiàn)貨供應(yīng)Anti-EFHC2 研究領(lǐng)域  細(xì)胞生物 免疫學(xué)

HCC 94（人鱗癌細(xì)胞（高分化））說明書Anti-EFHD1 研究領(lǐng)域  神經(jīng)生物學(xué) 信號轉(zhuǎn)導(dǎo) 干細(xì)胞 轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子 表觀遺傳學(xué)

大鼠肺血管平滑肌細(xì)胞*培養(yǎng)基現(xiàn)貨供應(yīng)Anti-EF-CBP2 研究領(lǐng)域  細(xì)胞生物 免疫學(xué)

MEM（不含L-谷氨酰胺、非必需氨基酸，含雙抗）價格Anti-EGFR5/CLEC14A 研究領(lǐng)域  細(xì)胞生物 免疫學(xué)

隱丹參酮35825-57-1價格Anti-phospho-MEK1/MAP2K1(Ser385)  研究領(lǐng)域  細(xì)胞生物 免疫學(xué)

羅漢果皂苷ⅢA1 88901-42-2 ?*Anti-EID1 研究領(lǐng)域  細(xì)胞生物 免疫學(xué)

人血清白蛋白（組份五）價格Anti-ESRRG/Estrogen Related Receptor gamma 研究領(lǐng)域  細(xì)胞生物 免疫學(xué)

鏈親和素實驗步驟Anti-ERRB2/Estrogen Related Receptor beta 研究領(lǐng)域  細(xì)胞生物 免疫學(xué)

硫酸魚精蛋白價格Anti-ERG25 研究領(lǐng)域  細(xì)胞生物 免疫學(xué)

DIPSO單鈉鹽價格Anti-EMP2 研究領(lǐng)域  細(xì)胞生物 免疫學(xué)

5-氟尿嘧啶價格Anti-Alpha-ENaC 研究領(lǐng)域  細(xì)胞生物 免疫學(xué)

噻苯隆保存Anti-ENTPD5/CD39L4 研究領(lǐng)域  細(xì)胞生物 免疫學(xué)

溴麝香草酚藍(lán)實驗步驟Anti-EST1A 研究領(lǐng)域  細(xì)胞生物 免疫學(xué)

β-細(xì)辛腦14-3-3 protein  14-3-3 蛋白（多肽抗原） EB病毒核抗原-3IgG

豨薟精14-3-3 family protein(Malus domestica (Apple) (Malus sylvestris))  植物14-3-3蛋白抗原 E-鈣粘附分子IgG

香葉FRA1/FOSL1 peptide   FRA-1多肽蛋白 內(nèi)皮素轉(zhuǎn)化酶1IgG

細(xì)辛AIF　(Apoptosis-Inducing Factor)  調(diào)亡誘導(dǎo)因子(多肽片斷抗原） 抗內(nèi)皮素轉(zhuǎn)化酶2IgG

鹽酸小檗胺Adenylate Kinase 1 (AK-1)  腺苷酸激酶-1 食道癌相關(guān)基因IgG

隱丹參酮Akt/PKB  蛋白激酶B（抗原） 細(xì)胞外基質(zhì)蛋白1IgG

標(biāo)準(zhǔn)品2,4-D/KLH(2,4-Dichlorophexyacetic acid)  2，4-二氯苯氧乙酸偶聯(lián)血藍(lán)蛋白抗體

遠(yuǎn)志酸2,4-D/BSA  2，4-二氯苯氧乙酸偶聯(lián)牛血清白蛋白 抗嗜酸性粒細(xì)胞陽離子蛋白IgG

羊藿苷CA153/MUC1/KL-6 peptide  乳腺癌相關(guān)抗原 外胚層發(fā)育不良IgG

延胡索乙素ALK (Anaplastic Lymphoma Kinase)(CD246Ag)  間變型淋巴瘤激酶（抗原） 溶血磷脂酸受體蛋白2IgG
溶血性曼氏桿菌PCR檢測試劑盒規(guī)格大鼠可溶性CD86(B7-2/sCD86)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量：100克

大鼠可溶性E選擇素(sE-selectin)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量：100克

大鼠可溶性P選擇素(sP-selectin)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量：1米

大鼠可溶性Toll樣受體2(sTLR2)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量：100克

大鼠可溶性Toll樣受體6(sTLR6)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量：1米

大鼠可溶性白介素6受體(sIL-6R)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量：2～8℃5克

大鼠可溶性凋亡相關(guān)因子(sFAS/Apo-1)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量：RT，避光1克

大鼠可溶性核因子κB受體活化因子配基(sRANKL)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量：50張/盒
檢測步驟：
一、 試劑的準(zhǔn)備
從試劑盒中取出熒光PCR反應(yīng)液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振蕩混勻后，10000rpm離心10s。
設(shè)所需要的PCR反應(yīng)管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1管陰性對照+1管陽性對照)，每個測試反應(yīng)體系配制如下表：
試劑 每個反應(yīng)加入的量 N個反應(yīng)加入的量
熒光PCR反應(yīng)液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
總量 15 µL N×15µL
（1） 計算好各試劑的使用量，加入一適當(dāng)體積潔凈離心管中，充分混勻，10000rpm離心10s，向設(shè)定的N個PCR反應(yīng)管中分別加入15μL熒光PCR反應(yīng)液，向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽性對照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬時離心10秒。
7.2 qPCR反應(yīng)條件
將各反應(yīng)管放入定量PCR儀器的反應(yīng)槽內(nèi)。
推薦循環(huán)條件:
1循環(huán) 50℃ for 2 min
預(yù)變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
PCR擴(kuò)增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時收集熒光信號。報告基團(tuán)：設(shè)置為FAM。淬滅基團(tuán)：NONE，請勿選擇ROX參比熒光。